黑龙江畜牧兽医

2020, No.599(11) 14-18+165

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抗猪瘟病毒单链抗体的原核表达及活性鉴定
Prokaryotic expression and activity identification of anti-Classical swine fever virus single chain antibody

刘金凤;覃绍敏;姜佳佳;白安斌;陈凤莲;秦树英;任鹏飞;霍孔林;吴健敏;

摘要(Abstract):

为了制备抗猪瘟病毒(CSFV)单链抗体(scFv)并鉴定其生物学活性,试验以编码特异性抗CSFV scFv基因序列为基础,按照大肠杆菌密码子偏爱性优化并合成scFv基因,将其克隆入pCzn1表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行Ni-IDA亲和层析纯化、SDS-PAGE检测和Western-blot鉴定,通过间接免疫荧光(IFA)和间接ELISA验证蛋白抗原的活性。结果表明:密码子优化合成的抗CSFV scFv基因全长768 bp,在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,其分子质量约28.0 ku,Western-blot检测显示纯化后的目的蛋白能被抗His标签单克隆抗体特异性识别,IFA和ELISA检测证实纯化复性后的蛋白可与CSFV发生特异性结合反应,且存在明显的浓度依赖性。说明应用原核表达系统可高效制备抗CSFV scFv。

关键词(KeyWords): 猪瘟病毒;密码子优化;单链抗体;原核表达;蛋白纯化;活性鉴定

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家现代农业产业技术体系广西生猪创新团队建设项目(nycytxgxcxtd-15-01);; 广西自然科学基金项目(2016GXNSFBA380078);; 广西创新驱动发展专项资金项目(桂科AA18118051)

作者(Author): 刘金凤;覃绍敏;姜佳佳;白安斌;陈凤莲;秦树英;任鹏飞;霍孔林;吴健敏;

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