黑龙江畜牧兽医

2020, No.603(15) 28-32+169

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猪E2F3基因3′UTR双荧光素酶报告基因质粒构建及其与miR-10a-5p的靶向验证
Construction of porcine E2F3 gene 3′UTR dual luciferase reporter plasmid and its targeting verification with miR-10a-5p

刘鸿艳;郑仰清;徐晶;张廷荣;

摘要(Abstract):

为了鉴定miR-10a-5p与猪E2F3基因的靶向关系,试验从生物信息miRNA Base数据库查询miR-10a-5p的相关信息,并运用MEGA 6.0软件分析其保守性,通过Target Scan生物信息学网站预测其潜在的靶基因及结合位点,然后PCR扩增E2F3基因3′非编码区(3′UTR)片段,构建E2F3的野生型(E2F3-3′UTR-wt)和突变型(E2F3-3′UTR-mut)双荧光素酶报告基因质粒,并分别与miR-10a-5p mimics、mimics NC共转染至293T细胞中,检测双荧光素酶活性变化。结果表明:miR-10a-5p在7个物种间具有高度保守性,成熟序列均为UACCCUGUAGAUCCGAAUUUGU;Target Scan生物信息学网站预测到miR-10a-5p具有包括E2F3基因在内的共241个潜在的靶基因;E2F3基因片段经PCR扩增获得大小约1 288 bp的清晰条带,测序结果与预期一致;转染miR-10a-5p mimics能显著降低猪E2F3基因野生型质粒双荧光素酶活性(P<0.05)。说明猪E2F3基因3′UTR双荧光素酶报告基因质粒构建成功,且其与miR-10a-5p之间存在靶向关系。

关键词(KeyWords): E2F3;miR-10a-5p;保守性;双荧光素酶;靶向验证;转染

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 山东省现代农业产业技术体系项目(SDAIT-08-13)

作者(Author): 刘鸿艳;郑仰清;徐晶;张廷荣;

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DOI:

参考文献(References):

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